盐析的原理
破坏了蛋白质在水中稳定存在的二个因素,从而使蛋白质发生沉淀。
1、破坏了水化层
在高浓度的中性盐溶液中,由于盐离子亲水性比蛋白质强,与蛋白质胶粒争夺与水结合,破坏了蛋白质的水化层。在高浓度的中性盐溶液中,由于蛋白质和盐离子对溶液中水分子都有吸引力,产生与水化合现象,但它们之间有竞争作用,当大量中性盐加入时,使得盐解离产生的离子争夺了溶液中大部分自由水,从而破坏蛋白质的水化作用,引起蛋白质溶解度降低,故从溶液中沉淀出来。
2、破坏了电荷
由于盐是强电解质,解离作用强,盐的解离可抑制蛋白质弱电解质的解离,使蛋白质带电荷减少,更容易聚集析出。
盐析注意事项
盐析的成败决定于溶液的pH值与离子强度,PH愈接近蛋白质的等电点,蛋白质就愈易沉淀。不同的蛋白质的溶解度与等电点不同,沉淀时所需的pH值与离子强度也不相同,故改变盐的浓度与溶液的pH值,便可将混合液中的蛋白质逐个盐析分开,这种分离蛋白质的方法称为分段盐析法(fractional salting out)。例如半饱和硫酸铵可沉淀血浆球蛋白,饱和硫酸铵则沉淀血浆清蛋白。